- 詳細分析組織細胞固定液的使用方法及注意事項
- 點擊次數(shù)：14794 更新時間：2019-05-17
- 組織細胞固定液的作用：組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固定，再進行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是，保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態(tài)和結構，而從免疫組化技術的角度，固定的作用不僅是使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結構；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原不導致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時，不產(chǎn)生過深的背景，影響對陽性物的判斷。
組織細胞固定液的使用說明：1、對于細胞樣品，去除培養(yǎng)液后，按照每六孔板一個孔加入 1 毫升固定液的比例，加入 4%多聚甲醛固定液。對于細胞涂片等其它細胞樣品，加入固定液的量以充分蓋住樣品為準。通常室溫固定 10-20 分鐘即可，但固定較長時間，例如 1-2 小時也是可以的。后續(xù)需使用適當?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/div>2、對組織切片，加入 4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準，或使用染色架進行固定。通常室溫固定 10-20 分鐘即可完成固定，但切片較厚時可以固定較長時間，例如 1-2 小時。后續(xù)需使用適當?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?/div>3、對于組織塊樣品，浸泡入 4%多聚甲醛固定液中，室溫或 4℃浸泡固定 2-24 小時。建議不超過 8 小時，除非組織塊特別大，難以滲透。固定完成后，放入裝有蒸餾水的離心管中清洗，每 15-30 分鐘換一次，共 6-8 次，建議在搖床進行，或用流水沖洗 1-2 小時。隨后梯度脫水，進行包埋。如果暫時不包埋可放入 70-75%的酒精中保存。
組織細胞固定液的注意事項：1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。2、多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結構可能部分或 *掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結果。因此，4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。- 上一篇：用這個方法來操作轉(zhuǎn)染試劑，工作效率更高哦！
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